基因组所三代单分子测序PacBio实现技术升级—超长读长助力基因组学钻研
近日,基因组所所级中心基因组平台三代单分子实时测序PacBio实现技术升级优化,实现了数据产量和读长的双重提升,一个SMRT Cell芯片可产出高达1Gb数据, reads均匀长度达到14kb,N50超过19kb,为基因组学有关钻研提供了有力支持。

PacBio 测序read和subread长度散布
利用三代单分子实时测序仪PacBio系统,平台提供的技术支持服务蕴含:
1.基因组de novo测序组装
PacBio测序read超长的特点,适合于基因组de novo组装。例如一个5Mb大幼的细菌基因组,只需一个SMRT Cell测序即可实现基因组finish,周期幼于5天。对于复杂基因组,预期Contig N50超过100kb,推荐de novo组装需50ⅹ以上的PacBio测序覆盖,二代测序数据和PacBio测序数据混合组装,推荐30ⅹ以上的PacBio测序覆盖,如用于基因组scaffold构建,推荐10ⅹ以上的PacBio测序覆盖。
2.全长转录本测序
受传统测序技术短读长的限度,较难获得全长转录本序列。在PacBio测序平台上,我们开发了全长cDNA测序和分析技术流程。PacBio测序产生的read长度弘远于绝大部门cDNA长度,因而无需经过后续序列拼接组装,即可获得正确全长cDNA序列,分析基因转录后可变剪切信息以及LncRNA表白等。
3.碱基建饰检测
PacBio测序另一个优势是可获得DNA聚合酶促反映的分子动力学数据,分析碱基建饰信息。由于碱基基团建饰后的位阻作用,DNA聚合酶在带有建饰碱基的核苷酸地位前后,阐发出延滞效应,经推算分析得到IPD ratio差距,分歧建饰的IPD ratio值分歧,从而获取碱基建饰信息。目前测序比力正确的建饰类型是m6A,另表5mC、5hmC、4mC等建饰信息也可得到,但必要特殊的样品处置或数据处置。
此表,基于PacBio系统,平台还提供基因组BAC克隆混合测序、长扩增子测序、极端GC含量DNA测序等技术开发服务。






